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姜分仪有机氯测定蛋白质的两种方法
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有机氯测定蛋白质的两种主要方法包括Lowry法和Biuret法。具体内容如下所示:
1.Lowry法
Lowry法是一种经典的蛋白质含量测定方法,基于酪氨酸和苯钌环的碱性条件下的氧化反应。具体步骤如下:
①将待测样品与碱性染料(如费罗菲定)发生络合反应。
②添加硫酸和焦磷酸铵将蛋白质沉淀。
③用乙醇洗涤沉淀,形成可溶的复合物。
④测量复合物在750nm波长处的光吸收度,其值与蛋白质含量成正比。
Lowry法的优点是操作简单,缺点是反应耗时长,且易受表面活性剂、螯合物和硫醇还原剂的影响。
2.Biuret法
Biuret法通过检测在碱性条件下蛋白质与铜离子发生的络合反应来测定蛋白质含量。具体步骤如下:
①将蛋白质样品与碱性染料溶液(如双缩脲试剂)混合,形成蓝色络合物。
②加入硫酸铜溶液,络合物转变为紫色络合物。
③在560nm波长处测量吸光度,用于定量测定蛋白质含量。
Biuret法的优点是操作简便,缺点是测量范围较窄,通常用于0.5g/L~10g/L含量的蛋白质溶液测定。
需要注意的是这两种方法的选择取决于实验条件、样品性质以及所需精度等因素。
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